1、先单独加入NaOH溶液是为了营造一个碱性环境，在碱性环境下双缩脲试剂B中的Cu2+与蛋白质肽键络合产生颜色反应。

2、如果先将双缩脲试剂A与双缩脲试剂B混合，即NaOH与CuSO4溶液混在一起，那么就会产生Cu(OH)2沉淀，药剂就会失去作用，看不到效果，也就无法判断是否存在蛋白质。

(资料图)

3、双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。

4、先将双缩脲试剂A加入组织样液，摇荡均匀（必须营造碱性环境），再加入双缩脲试剂B，摇荡均匀。

5、如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。

6、具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。

7、蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。

8、颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

9、扩展资料：双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。

10、在强碱性溶液中，双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物，称为双缩脲反应。

11、凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能够以一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

12、紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。

13、干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。

14、此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。

15、主要的缺点是灵敏度差，不适合微量蛋白的测定。

16、参考资料来源：百度百科-双缩脲法。

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